Tumors of female reproductive systemTumors of female reproductive systemОпухоли женской репродуктивной системы1994-40981999-8627Publishing House ABV Press110510.17650/1994-4098-2023-19-2-89-93MAMMOLOGY. ORIGINAL REPORTSМАММОЛОГИЯ. ОРИГИНАЛЬНЫЕ СТАТЬИPrognostic value of CD4+ in patients with Т1–2N0M0 breast cancerПрогностические возможности CD4+ при раке молочной железы Т1–2N0M0https://orcid.org/0000-0002-0871-9453PaltuevR. M.ПалтуевР. М.
Russian Federation

Ruslan M. Paltuev.

68 Leningradskaya St., Pesochnyy Settlement, Saint Petersburg 197758

Палтуев Руслан Маликович.

197758 Санкт-Петербург, пос. Песочный, ул. Ленинградская, 68

paltuev@mail.ruhttps://orcid.org/0000-0001-7797-088XKudaybergenovaA. G.КудайбергеноваА. Г.
Russian Federation

68 Leningradskaya St., Pesochnyy Settlement, Saint Petersburg 197758

197758 Санкт-Петербург, пос. Песочный, ул. Ленинградская, 68

https://orcid.org/0000-0003-0077-9619SemiglazovV. F.СемиглазовВ. Ф.
Russian Federation

68 Leningradskaya St., Pesochnyy Settlement, Saint Petersburg 197758

197758 Санкт-Петербург, пос. Песочный, ул. Ленинградская, 68

https://orcid.org/0000-0002-6598-1669KomyakhovA. V.КомяховА. В.
Russian Federation

68 Leningradskaya St., Pesochnyy Settlement, Saint Petersburg 197758

197758 Санкт-Петербург, пос. Песочный, ул. Ленинградская, 68

TseluykoA. I.ЦелуйкоА. И.
Russian Federation

68 Leningradskaya St., Pesochnyy Settlement, Saint Petersburg 197758

197758 Санкт-Петербург, пос. Песочный, ул. Ленинградская, 68

N.N. Petrov National Medical Research Center of Oncology, Ministry of Health of RussiaФГБУ «Национальный медицинский исследовательский центр онкологии им. Н.Н. Петрова» Минздрава России0508202319289932606202305082023https://ojrs.abvpress.ru/ojrs/article/view/1105

Aim. To evaluate the prognostic value of CD4+ in patients with T1–2N0M0 breast cancer.

Materials and methods. We performed a quantitative assessment of CD4+ T-lymphocytes in tumor stromal cells and determined the prognostic parameter using the method developed by us (patent No. RU2697709C1 dated 19.08.2019) in 394 patients diagnosed with infiltrative breast cancer. Survival of patients in the analyzed group was assessed over a period of 10 years.

Archival material from paraffin blocks of the «target group» was used in the work for molecular genetic profiling techniques (T1–2N0M0, 1118 patients, 2000–2009). A histological preparation stained with hematoxylin and eosin was scanned, and the central and peripheral zones of the tumor were isolated. To identify CD4+ T-lymphocytes, the immunohistochemical study of preparations obtained with rabbit anti-CD4 monoclonal antibodies was performed. After rescanning histological and immunohistochemical preparations, combining different immunohistochemical stains, the cell density in the tumor and stromal components was calculated in preparations stained with hematoxylin and eosin and CD4. For further calculations, we used the data obtained as a result of the number of stromal cells reduced to 1 mm2 (according to the preparation stained with hematoxylin and eosin), the so-called cell density per calculated number of CD4+-stained cells (cell area × proportion of CD4+ cells in percentages). The resulting ratio is used to predict the outcome of breast cancer: if its value is ≤ 50 %, the prognosis is assessed as favorable (in which the patient’s survival is 10 years or more).

Results. In 296 (75 %) of 394 observed patients, the proportion of CD4+ T-lymphocytes in tumor stromal cells was ≤ 50 %. Over 10 years, the overall survival of patients in this group was 93 %, which is considered a statistically favorable group for breast cancer (stages T1–2, N0). In 98 (25 %) of 394 observed patients, the proportion of CD4+ T-lymphocytes in tumor stromal cells was ˃50 %. Over 10 years, the overall survival of patients in this group was 82 %, which is considered a statistically unfavorable group for breast cancer (stages T1–2, N0).

Conclusion. Our findings suggest high accuracy of our method of breast cancer prognosis based on the quantitative assessment of CD4+ T-lymphocytes in tumor stromal cells. It can be used for breast cancer prognosis in early stages (T1–2, N0).

Цель исследования – оценить прогностические возможности CD4+ при раке молочной железы (РМЖ) Т1–2N0M0.

Материалы и методы. Осуществляли количественную оценку CD4+-Т-лимфоцитов в стромальных клетках опухоли и определяли прогностический параметр в соответствии с разработанным нами способом (патент № RU2697709C1 от 19.08.2019) у 394 пациентов с диагнозом инфильтративного РМЖ. Выживаемость пациентов в анализируемой группе оценена на протяжении периода 10 лет.

В работе был использован архивный материал из парафиновых блоков «таргетной группы» для методик молекулярно-генетического профилирования (T1–2N0M0, 1118 больных, 2000–2009 гг.). Осуществляли сканирование окрашенного гематоксилином и эозином гистологического препарата, выделяли центральную и периферическую зоны опухоли. для идентификации CD4+-Т-лимфоцитов проводили иммуногистохимическое исследование препаратов, полученных с кроличьими моноклональными антителами к CD4. После повторного сканирования гистологических и иммуногистохимических препаратов, совмещения различных иммуногистохимических окрасок проводили подсчет клеточной плотности в опухолевом и стромальном компонентах в препаратах, окрашенных гематоксилином и эозином и CD4. для дальнейших расчетов использовали данные, полученные в результате приведенного к 1 мм2 числа стромальных клеток (по окрашенному гематоксилином и эозином препарату), так называемую клеточную плотность на расчетное число CD4+-окрашенных клеток (клеточная площадь × доля CD4+-клеток в процентах). Полученное отношение используют для прогностической оценки исхода РМЖ: при его значении ≤50 % прогноз оценивают как благоприятный (при котором выживаемость пациента составляет 10 и более лет).

Результаты. У 296 (75 %) из 394 наблюдаемых больных содержание CD4+-Т-лимфоцитов в стромальных клетках опухоли составляло ≤50 %. за 10 лет общая выживаемость больных в данной группе составила 93 %, что при РМЖ (стадии Т1–2, N0) считается статистически благоприятной группой. у 98 (25 %) из 394 наблюдаемых больных указанное содержание CD4+-Т-лимфоцитов составляло ˃50 %. за 10 лет общая выживаемость больных в данной группе составила 82 %, что при РМЖ (стадии Т1–2, N0) считается статистически неблагоприятной группой.

Заключение. Полученные результаты свидетельствуют о высокой достоверности прогноза РМЖ на основании количественной оценки CD4+-Т-лимфоцитов в стромальных клетках опухоли. Разработанный способ может быть использован для определения прогноза РМЖ на ранних стадиях заболевания (Т1–2, N0).

breast cancer prognosisprognostic parametertumor-infiltrating lymphocytesimmunocompetent cellsCD4+-T-lymphocytesпрогноз рака молочной железыпрогностический параметринфильтрирующие опухоль лимфоцитыиммунокомпетентные клеткиCD4+-Т-лимфоцитыSalgado R., Denkert C., Demaria S. The evaluation of tumor-infiltrating lymphocytes (TILs) in breast cancer: recommendations by an International TILs Working Group 2014. Ann Oncol 2015;2(26):259–71. DOI: 10.1093/annonc/mdu450Loi S., Sirtaine N., Piette F. Prognostic and predictive value of tumor-infiltrating lymphocytes in a phase III randomized adjuvant breast cancer trial in node-positive breast cancer comparing the addition of docetaxel to doxorubicin with doxorubicin-based chemotherapy: BIG 02-98. J Clin Oncol 2013;7(31):860–7. DOI: 10.1200/JCO.2011.41.0902Dieci M.V., Radosevic-Robin N., Fineberg S. et al. Update on tumor-infiltrating lymphocytes (TILs) in breast cancer, including recommendations to assess TILs in residual disease after neoadjuvant therapy and in carcinoma in situ: A report of the International Immuno-Oncology Biomarker Working Group on Breast Cancer. Semin Cancer Biol 2018;Pt 2(52):16–25. DOI: 10.1016/j.semcancer.2017.10.003Dieci M.V., Criscitiello C., Goubar A. et al. Prognostic value of tumor-infiltrating lymphocytes on residual disease after primary chemotherapy for triple-negative breast cancer: A retrospective multicenter study. Ann Oncol 2014;3(25):611–8. DOI: 10.1093/annonc/mdt556Loi S., Michiels S., Salgado R. et al. Tumor infiltrating lymphocytes are prognostic in triple negative breast cancer and predictive for trastuzumab benefit in early breast cancer: results from the FinHER trial. Ann Oncol 2014;8(25):1544–50. DOI: 10.1093/annonc/mdu112Perez E.A. Abstract S1-06: Stromal tumor-infiltrating lymphocytes(S-TILs): In the alliance N9831 trial S-TILs are associated with chemotherapy benefit but not associated with trastuzumab benefit. Cancer Res 2015;9(Suppl 75):S1-06-S1-06.De Jong V.M.T., Wang Y., Opdam M. et al. Prognostic value of tumor infiltrating lymphocytes in young triple negative breast cancer patients who did not receive adjuvant systemic treatment; by the PARADIGM study group. Ann Oncol 2020;31:S303–S339. DOI: 10.1200/JCO.21.01536Gao Z.H., Li C.X., Liu M. et al. Predictive and prognostic role of tumour-infiltrating lymphocytes in breast cancer patients with different molecular subtypes: A meta-analysis. BMC Cancer 2020;20(1):1150. DOI: 10.1186/s12885-020-07654-yJiang X., Shapiro D.J. The immune system and inflammation in breast cancer. Mol Cell Endocrinol 2014;1(382):673–82. DOI: 10.1016/j.mce.2013.06.003Loi S., Michiels S., Loibl S. et al. The journey of tumor-infiltrating lymphocytes as a biomarker in breast cancer: Clinical utility in an era of checkpoint inhibition. Ann Oncol 2021;32(10):1236–44. DOI: 10.1016/j.annonc.2021.07.007Oda N., Shimazu K., Naoi Y. et al. Intratumoral regulatory T cells as an independent predictive factor for pathological complete response to neoadjuvant paclitaxel followed by 5-FU/epirubicin/ cyclophosphamide in breast cancer patients. Breast Cancer Res Treat 2012;1(136):107–16. DOI: 10.1007/s10549-012-2245-8Park J., Jonas S.F., Bataillon G. et al. Prognostic value of tumor-infiltrating lymphocytes in patients with early-stage triple-negative breast cancers (TNBC) who did not receive adjuvant chemotherapy. Ann Oncol 2019;30(12):1941–9. DOI: 10.1093/annonc/mdz395Seo A.N., Lee H.J., Kim E.J. et al. Tumour-infiltrating CD8+ lymphocytes as an independent predictive factor for pathological complete response to primary systemic therapy in breast cancer. Brit J Cancer 2013;10(109):2705–13. DOI: 10.1038/bjc.2013.634Kometova V.V., Zankin V.V., Khayrullin R.M., Rodionov V.V. A method for predicting the five-year survival rate of patients with infiltrating breast cancer by determining the total malignancy score. Patent RU2547561С1 dated 10.04.2015. Available at: https://patents.google.com/patent/RU2547561C1/en. (In Russ.)Кометова В.В., Занкин В.В., Хайруллин Р.М., Родионов В.В. Способ прогнозирования пятилетней выживаемости пациенток с инфильтрирующим раком молочной железы путем определения суммарного балла злокачественности. Патент RU2547561С1 от 10.04.2015. Доступно по: https://patents.google.com/patent/RU2547561C1/ru.Olek S., Schwachula T., Baron U. Method for determining cancer patient survival based on analyzing tumor infiltrating overall T-lymphocytes. Available at: https://patents.google.com/patent/US20130260378A1/en?oq=US2013260378.Paltuev R.M., Kudaybergenova A.G., Semiglazov V.F. et al. Method for predicting breast cancer. Patent RU2697709C1 dated 19.08.2019. (In Russ.)Палтуев Р.М., Кудайбергенова А.Г., Семиглазов В.Ф. и др. Способ прогноза рака молочной железы. Патент RU2697709C1 от 19.08.2019.Paltuev R.M., Kudaybergenova A.G., Semiglazov V.F., Komyakhov A.V. Automated analysis of cell density in breast cancer as an additional way to improve the objectivity and reliability of breast cancer prognosis. Opukholi zhenskoy reproduktivnoy systemy = Tumors of female reproductive system 2017;13(3):12–6. (In Russ.). DOI: 10.17650/1994-4098-2017-13-3-12-16Палтуев Р.М., Кудайбергенова А.Г., Семиглазов В.Ф., Комяхов А.В. Автоматизированный анализ клеточной плотности при раке молочной железы как дополнительный способ повысить объективность и достоверность прогноза рака молочной железы. Опухоли женской репродуктивной системы 2017;13(3):12–6. DOI: 10.17650/1994-4098-2017-13-3-12-16